تشخیص همزمان تایپ و ساب‌تایپ‌های ویروس آنفلوانزای A با روش مولکولی Multiplex RT-PCR

چکیده

با توجه به گسترش جهانی ویروس‌های آنفلوانزای پرندگان و خطر انتقال آن‌ها به انسان، تشخیص سریع، دقیق و همزمان تایپ و ساب‌تایپ‌های مختلف ویروس آنفلوانزای A از اهمیت بالایی در نظام‌های مراقبت و پایش اپیدمیولوژیک برخوردار است. ساب‌تایپ‌هایی مانند H5 و H9 به‌ویژه در مناطق خاورمیانه، به‌عنوان عوامل بالقوه ایجاد پاندمی، هم در جمعیت طیور و هم در انسان مطرح شده‌اند. هدف از این مطالعه، راه‌اندازی و ارزیابی یک روش مولکولی سریع و اختصاصی برای شناسایی همزمان تایپ و ساب‌تایپ‌های ویروس آنفلوانزای A با استفاده از تکنیک Multiplex RT-PCR بود.

در این پژوهش، پرایمرهای اختصاصی ژن ماتریکس (M) برای تعیین تایپ ویروس آنفلوانزای A و پرایمرهای اختصاصی ژن هماگلوتینین (HA) برای شناسایی ساب‌تایپ‌های H5 و H9 طراحی و استفاده شدند. واکنش‌های RT-PCR به سه صورت انجام گرفت: تعیین تایپ ویروس آنفلوانزا، تشخیص جداگانه ساب‌تایپ‌ها و در نهایت تشخیص همزمان ساب‌تایپ‌ها به روش Multiplex RT-PCR.

در مجموع ۱۴۷ نمونه سوآب کلواک و نای از طیور مشکوک به عفونت آنفلوانزا مورد بررسی قرار گرفت که از این تعداد، ۳۹ نمونه از نظر ساب‌تایپ H9 و ۱۱ نمونه از نظر ساب‌تایپ H5 مثبت گزارش شد. همچنین در بررسی ۲۶ نمونه سوآب نای انسانی مشکوک به آنفلوانزا، ۴ مورد عفونت با ویروس آنفلوانزای A شناسایی گردید. نتایج نشان داد که روش Multiplex RT-PCR قادر است تایپ و ساب‌تایپ‌های H5 و H9 ویروس آنفلوانزای A را به‌صورت سریع، همزمان و با ویژگی بالا شناسایی نماید.

یافته‌های این مطالعه مؤید آن است که Multiplex RT-PCR روشی کارآمد، دقیق و مناسب برای برنامه‌های پایش، تشخیص سریع و کنترل اپیدمی‌های ناشی از ویروس آنفلوانزا در انسان و طیور می‌باشد.

4

 Abstract

Influenza A viruses pose a significant threat to public health due to their wide host range and potential for zoonotic transmission. Rapid and accurate identification of influenza virus types and subtypes, particularly H5 and H9, is essential for effective surveillance and outbreak control. This study aimed to develop and evaluate a molecular method for simultaneous detection of influenza A virus type and its major subtypes using Multiplex RT-PCR.

Specific primers targeting the matrix (M) gene were used for influenza A virus typing, while hemagglutinin (HA) gene–specific primers were employed for the identification of H5 and H9 subtypes. RT-PCR assays were performed in three formats: influenza A typing, individual subtype detection, and simultaneous subtype identification using Multiplex RT-PCR.

A total of 147 cloacal and tracheal swab samples collected from poultry suspected of influenza infection were analyzed. Among these, 39 samples were positive for the H9 subtype and 11 samples for the H5 subtype. Additionally, analysis of 26 human nasopharyngeal swabs suspected of influenza infection revealed four cases positive for influenza A virus. The results demonstrated that Multiplex RT-PCR is a rapid, sensitive, and highly specific method for simultaneous detection of influenza A virus and its H5 and H9 subtypes.

This method represents a valuable tool for epidemiological surveillance, early diagnosis, and effective monitoring of influenza outbreaks in both human and avian populations.

4

💡 این مقاله با معرفی یک روش مولکولی سریع و کاملاً اختصاصی برای تشخیص همزمان تایپ و ساب‌تایپ‌های ویروس آنفلوانزای A، نقش مهمی در ارتقای پایش اپیدمیولوژیک و کنترل به‌موقع اپیدمی‌های خطرناک ایفا می‌کند. برای بررسی جزئیات روش، داده‌های آزمایشگاهی و نتایج کامل پژوهش، مطالعه متن اصلی مقاله توصیه می‌شود.

تشخیص همزمان تایپ و ساب تایپ های ویروس آنفلوانزای A با روش مولکولی Multiplex RT-PCR